GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1...

问题详情：

GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答： （1）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的        限制酶进行酶切．  （2）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有3种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第            泳道显示所鉴定的载体是正向连接的． （3）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的        体与提取的蛋白质杂交．当细胞培养的神经干细胞达到一定密度时产生接触抑制，换瓶后进行            培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．      （4）对于神经干细胞可以来源于胚胎干细胞的诱导分化，胚胎干细胞来源于            ，在培养时可以只*不分化，但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞，胚胎干细胞的这个特*称为                   ． （5）胚胎干细胞也可以来自于核移植的重组细胞，一般体细胞核移植要比胚胎细胞核移植难度大，原因是                           ，而取自卵巢的卵母细胞需要培养到          期，才可进行核移植．

【回答】

解：（1）质粒上有XhoⅠ识别位点，而且在启动子之后，所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切． （2）泳道①仅有一种条带，属于载体自连；泳道②有两种条带，且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同，为正向连接；泳道③有两种条带，长度与BamHⅠ酶切后结果相同，为反向连接． （3）检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法．培养动物细胞采用动物细胞培养法，当细胞密度达到一定程度，需要进行分瓶，进行传代培养． （4）对于神经干细胞可以来源于胚胎干细胞的诱导分化，胚胎干细胞来源于原始*腺和早期胚胎，在培养时可以只*不分化，但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞，胚胎干细胞的这个特*称为发育的全能*． （5）胚胎干细胞也可以来自于核移植的重组细胞，一般体细胞核移植要比胚胎细胞核移植难度大，原因是细胞分化程度大，细胞核不易实现全能*，而取自卵巢的卵母细胞需要培养到MⅡ中期期，才可进行核移植． 故*为： （1）XhoⅠ （2）② （3）抗体    　传代 （4）原始*腺和早期胚胎       发育的全能* （5）细胞分化程度大，细胞核不易实现全能*      MⅡ中期

知识点：胚胎工程

题型：填空题