血管内皮生长因子（VEGF）能促进眼部视网膜血管的病理*生长。临床上可用VEGF抗体的Fab片段（即抗体的活*...

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血管内皮生长因子（ VEGF）能促进眼部视网膜血管的病理*生长。临床上可用VEGF抗体的Fab片段（即抗体的活*片段）作为*物治疗视网膜病变。以下是利用大肠杆菌来大量合成该抗体片段的技术路线图，请回答下列问题：

（1）图中的质粒在基因工程中常作为           ，抗卡那霉素基因和抗四环素基因当作          。其中的核心步骤是         （填图中标号）

（2）科学家已经测出VEGF的抗体Fab片段的氨基*序列，因此可以通过       方法来获取目的基因。获取目的基因后，还需要在其两端加上限制酶HindⅢ和XhoⅠ识别序列和启动子T7等序列，T7的位置应该在      （填l、 2 3或4）处。

（3）大肠杆菌常用         处理，使之成为      细胞，以便吸收外源DNA；与重组质粒混合培养一段时间后，用分别添加卡那霉素和四环素的培养基进行筛选；如果大肠杆菌在添加卡那霉素的培养基中         ，在添加四环素的培养基中           ，则为需要的目的菌株。

（4）对筛选出的大肠杆菌中目的基因是否成功表达，可以用              技术进行检测。即用       与提取出的蛋白质杂交来鉴定是否合成抗体Fab片段蛋白。

【回答】

（1）（运）载体      标记基因       ① 

（2）人工合成（化学合成）    2或3 （答“2”或“3”均给分） 

（3）Ca2+ （或CaCl2）    感受态    能生长（或“能形成菌落”）    不能生长（或“不能形成菌落”）

（4）抗原-抗体杂交      血管内皮生长因子（VEGF）

知识点：生物技术的安全*和伦理问题

题型：填空题